A. 我要提问,我想请问的是荧光定量PCR检测支原体DNA,CT值27,39,结果呈阳性代表的是什么,有哪为网友知道请
一般来说,荧光定量PCR反应,CT值结果在18-24之间是比较好的结果,CT值大于24小于30左右也是可以接受的结果,CT值大于35以后基本可以认为该PCR反应没有扩增产物,你的实验结果27的那个CT值还可以用,39的那个说明根本就没有扩增产物,你可以从溶解扩增曲线上看一下,如果实在不放心可以把PCR产物跑一个琼脂糖凝胶电泳。对于你27的那个结果,优化一下体系条件,应该可以得到比较好的结果
B. 细胞支原体感染 检测试剂盒 怎么检测
支原体检测试剂盒操作步骤:
贴壁细胞:
1.被检细胞接种于无菌的6孔细胞培养板中,接种密度为1-2×104。同时,接种正常无支原体感染的同种细胞,作为阴性对照。
2.5天后,先吸去培养液,再加入1ml的固定液,静置20min,
3.吸去固定液,晾干。
4.于每孔中,加入1ml的Hoechst33258工作液(Hoechst33258工作液须覆盖全部被检细胞),37℃避光放置15-20min或室温静置20~30min。
5.吸去Hoechst33258工作液,加入2ml灭菌超纯水洗涤三次,直接风干。风干后加入一滴封片液,并以盖玻片覆盖。
6.荧光显微镜观察。用紫外激发光激发,观察细胞周围是否有蓝色荧光小点或串珠状荧光小点。
悬浮细胞:
1.收集需检测的细胞,1500rpm,5min。
2.将收集的细胞涂片于载玻片上,再加1ml的固定液,静置20min。
3.吸去固定液,晾干。
4.于每孔中,加入1ml的Hoechst33258工作液(Hoechst33258工作液须覆盖全部被检细胞),37℃避光放置15~20min或室温静置20~30min。
5.吸去Hoechst33258工作液,用无菌水洗涤玻片3次,直接风干。风干后加入一滴封固液,并以盖玻片覆盖。
6.荧光显微镜观察。用紫外激发光激发,观察细胞周围是否有蓝色荧光小点或串珠状荧光小点。
结果判断(参考):
阴性:仅见细胞的细胞核呈现黄绿色荧光。
阳性:除细胞外,细胞周围可见大量的大小均一的荧光着色颗粒。
注意事项:
Hoechst工作液对人体有害,请注意防护。
固定液有刺激性气味,建议在通风橱进行固定。
支原体检测时,最好用不含抗生素的培养液培养2~3代,这样容易避免假阴性结果。
检测支原体污染,可以使用支原体高效Vero细胞,这样可以提高检测灵敏度,即将被检测样品接种于Vero细胞进行检测。