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支原体检测样品怎么处理

发布时间:2024-10-29 15:35:04

A. 我要提问,我想请问的是荧光定量PCR检测支原体DNA,CT值27,39,结果呈阳性代表的是什么,有哪为网友知道请

一般来说,荧光定量PCR反应,CT值结果在18-24之间是比较好的结果,CT值大于24小于30左右也是可以接受的结果,CT值大于35以后基本可以认为该PCR反应没有扩增产物,你的实验结果27的那个CT值还可以用,39的那个说明根本就没有扩增产物,你可以从溶解扩增曲线上看一下,如果实在不放心可以把PCR产物跑一个琼脂糖凝胶电泳。对于你27的那个结果,优化一下体系条件,应该可以得到比较好的结果

B. 细胞支原体感染 检测试剂盒 怎么检测

支原体检测试剂盒操作步骤:

贴壁细胞:

1.被检细胞接种于无菌的6孔细胞培养板中,接种密度为1-2×104。同时,接种正常无支原体感染的同种细胞,作为阴性对照。

2.5天后,先吸去培养液,再加入1ml的固定液,静置20min,

3.吸去固定液,晾干。

4.于每孔中,加入1ml的Hoechst33258工作液(Hoechst33258工作液须覆盖全部被检细胞),37℃避光放置15-20min或室温静置20~30min。

5.吸去Hoechst33258工作液,加入2ml灭菌超纯水洗涤三次,直接风干。风干后加入一滴封片液,并以盖玻片覆盖。

6.荧光显微镜观察。用紫外激发光激发,观察细胞周围是否有蓝色荧光小点或串珠状荧光小点。

悬浮细胞:

1.收集需检测的细胞,1500rpm,5min。

2.将收集的细胞涂片于载玻片上,再加1ml的固定液,静置20min。

3.吸去固定液,晾干。

4.于每孔中,加入1ml的Hoechst33258工作液(Hoechst33258工作液须覆盖全部被检细胞),37℃避光放置15~20min或室温静置20~30min。

5.吸去Hoechst33258工作液,用无菌水洗涤玻片3次,直接风干。风干后加入一滴封固液,并以盖玻片覆盖。

6.荧光显微镜观察。用紫外激发光激发,观察细胞周围是否有蓝色荧光小点或串珠状荧光小点。

结果判断(参考):

阴性:仅见细胞的细胞核呈现黄绿色荧光。

阳性:除细胞外,细胞周围可见大量的大小均一的荧光着色颗粒。

注意事项:

  1. Hoechst工作液对人体有害,请注意防护。

  2. 固定液有刺激性气味,建议在通风橱进行固定。

  3. 支原体检测时,最好用不含抗生素的培养液培养2~3代,这样容易避免假阴性结果。

  4. 检测支原体污染,可以使用支原体高效Vero细胞,这样可以提高检测灵敏度,即将被检测样品接种于Vero细胞进行检测。

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