① 猪病常用的血清学诊断方法有哪些
抗原和相应的抗体在动物体内或体外都能发生特异性结合反应,这种反应称为抗原抗体反应,习惯上把体内的抗原抗体反应称为免疫反应,体外的抗原抗体反应称为血清学反应,因为抗体主要存在于血清中。
血清学反应可以用已知的抗体检查未知的抗原,也可用已知抗原测定未知的抗体。人们根据抗体能与相应抗原发生反应并出现可见的抗原—抗体复合物的原理,设计了许多血清学诊断方法,不仅可以检测动物体内乃至体外的病原微生物,或其抗原性成分,而且还可以测定动物机体对病原微生物的侵袭或对其抗原成分的免疫反应。在抗原—抗体复合物成不可见状态时,可以通过琼脂扩散、凝集实验以及酶标记等指示系统,使其变为可见或可测状态。
目前已知的血清学诊断方法很多,现仅介绍几种在目前条件下规模化猪场通过学习都能做到的诊断方法:
(1)凝集试验猪病诊断过程中常用的操作方法有以下几种:
①全血平板凝集试验实践中主要用于细菌性疾病的抗体检测和抗原(经分离培养后)的鉴定。现举例用已知猪丹毒抗原(丹毒杆菌的纯培养液)测定被检猪血清中的抗体。其操作步骤如下:
a.材料猪丹毒凝集抗原,玻片,9号针头,酒精棉球,酒精灯,铂耳(取血环)等。b.操作用铂耳取已知抗原1滴,置于玻片上。用酒精棉球擦拭针头,铂耳在酒精灯上灼烧消毒。用针头刺破被检猪的耳静脉,以铂耳取血与玻片上的抗原等量混合,在2~3分钟内观察结果。c.结果判定出现颗粒状的凝集,为阳性反应。否则为阴性。
②试管凝集试验是一种定量法,用于测定被检血清或其他体液中有否某种抗体及其效价,可做临床的辅助诊断,或用于流行病学监测。在猪场中,本法常用于猪布氏杆菌病的诊断。
A.材料布氏杆菌病试管凝集抗原(1∶20倍稀释),布氏杆菌病阳性血清、阴性血清(1∶25倍稀释),稀释液(0.5 %石炭酸生理盐水),灭菌小试管,1毫升吸管,试管架,待检血清等。B.操作取试管7支置于试管架上,设阳性和阴性血清及抗原对照各1支,测定管4支,以后每增加1个样品,只需增加4支测定管。
按表10示意稀释血清,加抗原,完成后每支试管内应含1毫升液体。
② 规模化养猪场做抗体水平检测如何有效采样
众所周知,经过高度选育的猪群对疾病特异和非特异抵抗的免疫记忆逐代减少,有限的空间和较高的饲养密度进一步加剧了猪群抵抗力的降低,一旦传染病爆发将带来沉重的打击,因此猪群健康问题是规模化养猪业发展的主要障碍,
猪场的防疫工作是当前规模化养猪工作中重点。
猪群的疫苗免疫是防疫传染病的有效途径,免疫检测是判断和评估猪群免疫效果的主要手段。对一个养猪场的免疫效果做出科学的评价,首要的问题就是要做到有效采样,涉及到以下几个方面:
采样要有一定数量,才有统计学意义,采样品数量太少,不足以代表整个养猪场的抗体水平,样品数量多,不经济。根据统计学一般规律,采样量20头时可信度可达98%,30头时可信度达99%,40头时可信度达到99.5%,50头时可信度达到99.9%,因此我们建议每个阶段分别至少采样30头,就基本上可以代表整体水平。由于考虑到种公猪的特殊重要性,我们要求每头公猪都需要采样。
采健康的猪,不采病猪,同时也要保证是随机采样,保证各个胎次都比较均衡。采血时候尽量避免污染,采血部位用酒精棉擦拭消毒,采血量至少2毫升,才能保证析出来足够量的血清用于检测。采集的样品标记要清楚,编号要有规律,样品的排列要有顺序,便于检测,统计结果。采集样品装放有冰袋的保温盒及时送到实验室,在运送途中尽量避免摇晃,以免溶血。采集的样品要有详细的说明,包括:日龄,胎龄,猪群种类,健康状况,最后免疫时间和疫苗的来源等数据。
我们建议有条件规模化猪场一年可以检测2次,如果有很好的条件可以每年检测4次。
③ 猪场中,什么是抗体监测和净化。该怎么做
抗体监测,是利用血清学方法,现在常用ELISA检测试剂盒,对猪场的不同群体、不同阶段的猪,进行每个季度1次的血清抗体常规监测,通过分析群体抗体滴度、群体离散度和群体转阳率,综合评价猪群整体免疫效果和稳定性,从而进行疫病预警和免疫等工作的调整。
净化,是通过一系列的方法(免疫、监测,封群、驯化、自繁自养、全进全出等生物安全措施方法),将猪场中存在的某种致病因子去除,达到猪场中不再有某种疫病的存在。
针对不同的猪场、不同的疫病,采用不同的监测和净化方案。
④ 猪兰耳抗体KQ值是什么意思,多少是合格
KQ值就是S/P值,只是多乘以100。以使用科前生物公司ELISA试剂盒(间接ELSIA法)检测猪血清中的蓝耳病病毒抗体为例,仅当阳性对照OD630 nm≥0.7,阴性对照OD630 nm<0.3时试验成立,计算KQ 值。KQ=(样品OD630 nm÷ 阳性对照OD630 nm 平均值)×100,当KQ≥20,判定为抗体阳性,KQ<20,判定为抗体阴性。
需注意两点:(1)该试剂盒必须在阴、阳性对照实测值符合规定的条件下,才能计算待测样品的KQ值,否则结果无意义。(2)任何公司生产的任何检测产品,甚至对于不同检测对象,判定方法及依据可能不同,没有绝对的正确或错误,最好结合多种检测方法、多次检测再下结论为宜。
比如说,这里假设阳性对照血清OD630实测值等于0.80,阴性对照血清OD630实测值等于0.25,而某待测血清样品的OD630等于0.20,便可依据0.20/0.80*100=25>20判定待测血清样品抗体为阳性。然而,当考虑到该待测血清样品的OD630=0.2却小于阴性对照的情况,刚才所做出的判定可能有误,即该份待测血清样品很可能是抗体阴性。