① HIV抗体检测要做多久
艾滋病病毒进入人体后,人体免疫系统可以产生相应的艾滋病病毒抗体。检测血液中的艾滋病病毒抗体是目前最常用的确诊艾滋病病毒感染的实验室方法。那么, HIV抗体检测要做多久 ?
1、酶联法 :即“酶联免疫法”,简称ELISA。它的中心就是让抗体与酶复合物结合,然后通过显色来检测。步骤很简单:ELISA用血清来检测,首先血液要经过至少半个小时的凝集,然后取血清。将酶复合物用稀释液稀释后,加血清及阴性、阳性对照,还有质控品。经过一个小时的孵育,然后洗板,加底物,半个小时避光反应后加终止液即完成反应部分,然后读数。由数值来判断结果的阴性或阳性。
严格的讲,如果第一次检测为阳性的话,无论是哪个实验室,必须按照CDC的HIV操作规程来进行第二次检测,第二次的方法必须与第一次的不同,如还是阳性,将送艾滋病确认实验室确认。
2、快速法 :即“金标法”,又叫“胶体金法”,金标法是国际上较为先进的灵敏,特异,快速,简便,准确率高的体外诊断方法。测定结果仅凭特制的检测试纸在短时间内即可获得。金标法(艾滋病检测试纸),取血后滴在试纸上,用15分钟的时间观察该试纸有无颜色变化。
艾滋病快速检测法可以在家里自己检测,操作简单方便,不需要特殊的仪器,在艾滋病试纸上先滴两滴血,再滴一滴稀释液,然后等待15分钟读取结果。结果判读也很简单,如果试纸上出现一条红色的直线,说明是阴性,如果是两条红线,就是阳性。如果检测出现阳性,按照HIV检测流程,需要进行复测。
使用快速法(艾滋病试纸)进行艾滋病自我检测应该在专业人员指导下进行,以确保整个自测操作过程规范正确,结果准确可靠。
3、蛋白免疫印迹法(WB)
艾滋病确诊实验室常用的方法,主要用于确认试验,当初筛出现阳性时,需采用此方法进行确认实验。基本原理是HIV全病毒抗原经过SDS-PAGE电泳,将分子量大小不等的蛋白带分离开来,然后再把这些已经分离的不同蛋白带电转移到硝酸纤维素膜上。将此膜切割成条状,每一条硝酸纤维素膜上均含有经电泳分离过的HIV病毒抗原。将待检血清样品用稀释液稀释成1/100,再把它直接加到硝酸纤维素膜上,恒温震荡,使其充分接触反应。血清中若含有抗HIV抗体,就会与膜条上的抗原带相结合。加入抗人IgG酶结合物和底物后,即可使有反应的抗原抗体结合带呈现紫褐色,根据出现条带情况判定结果。
1、HIV检查需要空腹吗
HIV检查是定性试验而非定量试验,不受饮食和药物的影响,因而检测前不需要空腹、禁食。 另外,艾滋病病毒抗体的检测是特异性的,而且抗体水平不受体温、药物等的影响。因此,一般性的生病、服药不会影响艾滋病病毒抗体检测结果。
2、HIV检查能喝水吗
HIV检查能喝谁。HIV检查是指采用实验室方法对人体血液、其他体液、组织器官、血液衍生物等进行病毒以及抗体相关指标检测,喝水吃饭都没有影响。
3、HIV检查多久出结果
HIV检查分为初筛和确证两个步骤。初筛酶联免疫试验需要大约两到三个小时,如果用快速试剂进行初筛检测,则可以在半小时之内出结果。初筛试验结果阳性就需要做进一步复检和确证,确证检测的时间是一到两天。但以上仅仅是试验本身的时间,具体操作时还需考虑标本运送时间和各个试验室的工作安排,各个实验室的情况不一样,很难有统一的标准。在传统检测中,收集到的样本要送到一个中心实验室进行检测,这种方法可能会要求孕妇一周后或更长时间后回来看结果。
1、检测前半小时应适量饮水避免血液过于粘稠。
2、准备好:酒精,药棉,计时器,并用用清水和肥皂洗干净双手。
3、检测应在室温4度以上进行操作;扎针取血前应该先用酒精消毒采血部位(一般是手指),然后按摩,促使血液流通。
4、出血后,可轻轻挤手指,将受检血液滴入加样孔,一般用3滴血。
5、滴入血液后10秒,滴入1滴缓冲液就足够了,此时开始计时。(如果血液足够顺利到达检测C区可不加缓冲液)
6、加样后15分钟可以观察结果,一条线为阴性,二条线为阳性,超过30分钟结果不准确。(15-30分钟结果最准确。)
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② 艾滋病抗体的检查方法
艾滋病病毒抗体检测
艾滋病病毒抗体检测:检测血液中的艾滋病病毒抗体是目前最常用的检测艾滋病病毒感染的实验室方法,一般要经过两个步骤:首先做初筛试验,如果为阳性,再做确认试验,确认试验阳性才可诊断为艾滋病病毒感染。
常用的方法有:
1病原检测病原检测主要指用病毒分离培养、电镜形态观察、病毒抗原检测和基因测定等方法从宿主标本中直接检测病毒或病毒基因。由于前两种方法难度大,且需要特殊设备和专业技术人员。因此仅抗原检测和RT-PCR(反转录-PCR)可用于临床诊断。
2 抗体检测血清中HIV抗体是判断HIV感染的间接指标。根据其主要的适用范围,可将现有HIV抗体检测方法分为筛检试验和确证试验。
3 确证试剂筛检实验阳性血清的确证最常用的是Western blot(WB),由于该法相对窗口期较长,灵敏度稍差,而且成本高昂,因此只适合作为确证实验。随着第三代和第四代HIV诊断试剂灵敏度的提高,WB已越来越满足不了对其作为确证实验的要求。FDA批准的另一类筛检确证试剂是-免疫荧光-试验(IFA)。IFA比WB的成本低,而且操作也相对简单,整个过程在1-1.5小时内即可结束。此法的主要缺点是需要昂贵的荧光检测仪和有经验的专业人员来观察评判结果,而且实验结果无法长期保存。现在FDA推荐在向WB不能确定的供血员发布最终结果时以IFA的阴性或阳性为准,但不作为血液合格的标准。
4筛检试验筛检试验主要用于对供血员进行筛查,因此要求操作简便,成本低廉,而且灵敏、特异。目前世界上主要的筛检方法仍然是ELISA,还有少数的颗粒凝集试剂和快速ELISA试剂。ELISA有很高的灵敏度和特异性,操作简单,仅需要实验室配备酶标仪和洗板机即可应用,特别适合于试验室大规模筛检使用。颗粒凝集实验是另一种操作简单方便,成本低廉的检测方法,该方法结果可通过肉眼判定,灵敏度很高,特别适合发展中国家或大量筛选供血员时使用,缺点是必须使用新鲜样品,特异性较差。80年代后期发展起来的斑点印迹检测(Dot-blot assay)是一种快速ELISA(Rapid ELISA)方法,这种方法操作极为简便,过程短暂,整个过程多数在5-10分钟内甚至3分钟内即可结束,但该法比ELISA和颗粒凝集试剂昂贵得多。金免疫测定是以胶体金为标记物,以硝酸纤维素膜为载体的固相免疫测定,分为渗滤和层析两种形式。用于HIV抗体检体金试纸条属于金免疫层析,且大多数为间接法及双抗原夹心法,两种方法各有优缺点,但都简单而快速,数分钟即可得出结论,不需仪器设备,操作人员不需特殊训练,试剂稳定,适用于单份测定等。
③ 血站是用什么方法检测HIV抗体的
HIV-抗体检测方法
常见检测方法
目前作为诊断手段使用的检测主要包括抗HIV病毒抗体检测、病毒培养、核酸检测和抗原检测。其中对病毒抗体的检测是最常规使用的方法,这不但是由于这类检测特异性、敏感性较高,方法相对简便、成熟,更重要的原因是HIV抗体在病毒感染后除早期短暂的”窗口期”外的整个生命期间长期稳定地存在并可被检测到。在一些特殊情况下,当抗体检测无法满足HIV感染诊断的需要时,病毒分离及测定、核酸检测、抗原检测可作为辅助手段使用,这包括对非典型血清学反应样品的诊断、HIV感染的窗口期诊断、新生儿早期诊断和对特殊样品的诊断。 一、 酶联免疫吸附试验(ELISA)
目前应用的ELISA法有8种之多。它们的特异性和敏感性超过99%。
二、 颗粒凝集法(PA)
PA为快速、简便的一种筛选方法。如属阳性,应经WB证实。PA不需任何特殊仪器,其结果用肉眼可判别。全过程仅需5分钟。缺点有假阳性,且价格昂贵。
三、快速试剂
(一)人类免疫缺陷病毒(HIV)1+2型抗体诊断试剂(胶体硒法)
雅培人类免疫缺陷病毒抗体诊断试剂(胶体硒法)是用于体外,肉眼观察,定性的免疫分析,检测血清或血浆中的HIV-1和HIV-2抗体,用于帮助受感染个体的HIV-1和HIV-2抗体。本品仅用于无偿献血员现场初筛及临床紧急情况的使用,本品检测阳性者,需进行进一步筛查确认。
(二)InstantCHEKTM-HIVl+2金标快速诊断试剂
InstantCHEKTM-HIV1+2是一种快速、简单、灵敏的检验方法, 用以检测艾滋病病毒(HIV-1和HIV-2)的抗体。该方法适用于初筛检测,凡由该试剂测定为阳性者,需用另一种方法检测如ELISA或用蛋白印记法确定。
四、HIV-抗体确认实验
免疫印迹试验(WB)、条带免疫试验(LIATEK HIVⅢ)、放射免疫沉淀试验(RIPA)及免疫荧光试验(IFA)。国内常用的确认试验方法是WB。
(一_免疫印迹实验(westernblot,WB)是广泛用于许多传染病诊断的实验方法,就HIV的病原学诊断而言,它是首选的用以确认HIV抗体的确认实验方法,WB的检测结果常常被作为鉴别其他检验方法优劣的“金标准”。
确认试验流程:
有HIV-1/2混合型和单一的HIV-1或HIV-2型。先用HIV-1/2混合型试剂进行检测,如果呈阴性反应,则报告HIV抗体阴性;如果呈阳性反应,则报告HIV-1抗体阳性;如果不满足阳性标准,则判为HIV抗体检测结果不确定。如果出现HIV-2型的特异性指示条带,需用HIV-2型免疫印迹试剂再做HIV-2的抗体确认试验,呈阴性反应,报告HIV-2抗体阴性;呈阳性反应则报告HIV-2抗体血清学阳性,并将样品送国家参比实验室进行核酸序列分析,
WB的敏感性一般不低于初筛实验,但它的特异性很高,这主要是基于HIV不同抗原组分的分离以及浓缩和纯化,能够检测针对不同抗原成分的抗体,因而能够用WB方法鉴别初筛实验的准确性。从WB确认试验结果看出,初筛试验尽管选择质量较好的试剂,如第三代ELISA,仍会有假阳性出现,必须通过确认试验才能得出准确结果。
(二)免疫荧光实验(IFA)
IFA法经济、简便、快速,曾被FDA推荐用于WB不确定样品的诊断。但需要昂贵的荧光显微镜,需要受过良好训练的技术人员、观察和解释结果易受主观因素的影响,结果不宜长期保存,IFA不宜在一般的实验室开展和应用。
④ 抗体检测需要空腹吗
我们在体检的时候,经常要求空腹去检查,医生都会要求空腹,空腹检查是为了检验的真实性,吃饭会影响血液中各项指标的值,那么,很多朋友在检查丙肝抗体的时候,也会非常关心是否需要空腹去进行,提醒:丙肝抗体检查和人体代谢没有直接关系,是不需要空腹的。
丙肝抗体检查和乙肝抗体检查是不一样的,乙肝抗体是一种保护性抗体,乙肝抗体阳性是一种好的表现。而丙肝抗体不是保护性的,是免疫系统攻击丙肝病毒的产生的,需要结合肝功能以及肝脏B超等检查结果,确定是否感染丙肝,所以检查肝功能和B超是需要空腹的,所以还是建议空腹检查。
丙肝抗体检查需要空腹吗?是否感染丙肝,只检查一项丙肝抗体,丙肝抗体阳性是不能够证实感染丙肝的,丙肝抗体只能证明人体感染过丙肝病毒,但是免疫系统不断攻击丙肝病毒,过一段时间病毒也可能会被杀死完,所以抗体存在但是人不一定是丙肝。
所以检查是否感染丙肝一定要检查丙肝病毒,如果丙肝病毒数量大,且带遗传物质,则能确诊丙肝。所以检查丙肝还是需要空腹的。
丙肝抗体检查出阳性后,说明人体曾经或限制感染了丙肝病毒,丙肝病毒刺激人体产生了抗体,因此要进一步的检查血液中的是否有病毒,建议患者确诊丙肝不要单一检查丙肝抗体,一定要结合丙肝病毒,肝功能等检查,一旦检查出,立即治疗,科学的治疗是健康的前提,任何疾病早发现早治疗都是非常好的,一定不要等到症状出现了明显异常才去重视治疗。
⑤ 乙肝抗原抗体检测实验的主要步骤
① 取出包被好的板,加入待测血清,再加入酶标记抗体,置湿合37℃30-45min
② 取出以洗涤剂洗涤3次,每次3-5min
③ 加入显色液,置于37℃保温箱15-30min
⑥ 冰岛新冠病毒核酸检测及血清抗体检测常见问题解答
从冰岛乘坐飞机回到中国在登机前48小时内完成新冠病毒核酸检测和血清特异性IgM抗体检测,然后凭检测双阴性证明申领带“HS”标识的绿色健康码或“HDC”标识的健康状况声明书二维码登机。下文是对检测中相关问题的解答。
自11月7日起,自冰岛搭乘航班赴华的中、外籍乘客须于登机前48小时内完成新冠病毒核酸检测和血清特异性IgM抗体检测,然后凭检测双阴性证明申领带“HS”标识的绿色健康码或“HDC”标识的健康状况声明书二维码登机。航空公司在乘客登机前予以查验。驻冰岛使馆现就大家比较关心的问题说明如下:
一、在冰岛如何预约新冠病毒核酸检测和血清IgM抗体检测?
在冰岛进行新冠病毒核酸检测和血清IgM抗体检测时,请您提前同住所附近的社区医院联系,预约进行核酸检测和血清IgM抗体检测采样,社区医院的分布及纤裂联系方式可在冰岛健康中心网站查询(https://www.heilsuvera.is/en/map/),社区医院一般会在采样后24小时内出具检测报告。请您在预约时向社区医院说明相关检测报告将用于国际旅行,并告知其出发时间,院方会据此尽快为您安排采样并及时出具检测报告。
特别提示:检测费用自理。
二、注意到乘机回国须于登机前2天内完成核酸、血清IgM抗体采样、检测的要求,核酸检测时限缩短了,毁颤闭还增加了血清抗体检测,上述要求出于什么考虑?
近期,全球新冠肺炎疫情反弹明显,多国爆发“第二波”疫情并收紧防疫措施,国际旅行时面临更大健康和安全风险。
中国驻外使领馆结合疫情形势发展变化,近期调整了搭乘航班赴华人员登机前核酸检测的时限,并增加血清抗体检测要求,提出上述要求的目的是为了降低疫情跨境传播风险。建议您坚持“非必要,不旅行”原则,尽量避免跨境旅行,并做好疫情防控。
三、我要从冰岛经丹麦中转回国,该怎么申领健康码?
对于自冰岛出发,经第三国中转赴华的中国乘客,需在离冰前往中转地航班起飞前48小时内进行新冠病毒核酸及血清IgM抗体检测,并取得两项检测的双阴性证明(以下简称“双阴性证明”)。凭借双阴性证明,乘客向中国驻冰岛大使馆申领带“HS”标识的绿色健康码(HS码)后,方可乘机前往中转地。抵达中转地后,在赴华航班起飞前48小时内,乘客需在中国驻中转地使领馆认可的检测机构再次进行新冠病毒核酸及血清IgM抗体检测,并取得两项检测的双阴性证明。乘客凭借双阴性证明向中国驻中转地使领馆申领健康码(HS码)后,方可乘机赴华。
例如,中国公民王先生拟搭乘12月3日(周三)的航班从冰岛前往哥本哈根,再乘坐12月5日(周五)的航班前往中国。王先生需要12月1日在冰岛进行新冠病毒核酸及血清IgM抗体检测,并凭双阴性证明向我馆申领健康码,方可乘机前往哥本哈根。王先生抵达哥本哈根后,需在赴华航班起飞前48小时内再次进行新冠病毒核酸及血清IgM抗体检测,并凭双阴性证明向中国驻丹麦使馆申领健康码登机。同时,根据目前作法,在丹麦转机的乘客也可直接持双阴性证明登机。
特别提示:冰岛社区医院一般可在采样后24小时内出具检测结果,但为避免因特殊情况导致未能及时出具检测报告,请您预约核酸检测时务必向院方说明检测报告将用于国际旅行,请其尽快出具检测报告。由于审核需要时间,为避免给您自身带来不便,请在取得检测报告后立即上传。若因申请人上传过晚导致未能及时审核,责任自负。
中国驻各国使领馆对新冠病毒核酸检测和IgM抗体检测结果远端申报要求不尽相同。建议乘客密切关注各有关使领馆网站,准确掌握最新要求。请务必提前详细了解中转地入境、防疫、检测等相关信息,选择合适的中转航班,以免造成拒绝入境、滞留等不良后果。
乘客在获得健康码后,请严格自律,加强自我防护,切勿松懈,避免前往人口密集场所等感染高风险地区,以负责任态度保护自己、家人和即将同机旅行的其他乘客。
四、我从冰岛出发,可否购买转机直达北京的机票?
不能。根据中国有关部门要求,从奥地利维也纳、丹麦哥本哈根、瑞典斯德哥尔摩、希腊雅典、加拿大温哥华、泰国曼谷、柬埔寨金边、巴基斯坦伊斯兰堡和卡拉奇等城市直达北京的航班仅向该国公民和居住在该国的中国公民开放,冰岛等洞空其他国家居民无法登机,请勿冒险尝试经过上述城市转机赴京,以免旅途遇阻滞留。上述航线可能随时发生变化,请密切关注中国国际航空公司等有关航司官方网站最新信息。
五、我年纪大,不会使用微信,更不会申请健康码,但又必须回国,该怎么办?
针对不会使用微信的中老年人或婴幼儿,健康码国际版小程序中特加入“为他人填报检测情况”这一功能。您可请家人、朋友为您填报检测情况,成功申请健康码后,凭打印出的有效健康码图片或手机截图登机。
六、我的检测报告上有多个日期,上传检测报告时“检测采样日期”一栏应填写哪个日期?
应填写检测报告的采样日期。请勿填写报告出具日期或报告打印日期,详见下图。请务必仔细浏览检测报告并认真准确填写报告采样日期。
七、健康码的有效期是从上传核酸检测报告到小程序的时间起算吗?
不是。健康码的有效期是从检测报告的采样日期起算。例如,您核酸检测报告和血清IgM检测报告上显示的采样日期为12月1日,但您12月2日才将该检测报告上传到小程序,那么审核通过后您核酸码的有效期仍是从12月1日起开始计算。如两项检测非同一天进行,采样日期则填写较早采样检测的采样信息。例如,您核酸检测报告采样日期为12月1日,血清IgM抗体检测采样日期为12月2日,那么,上传的采样日期应为12月1日。
八、通过小程序上传检测报告后我还需要打电话确认吗?多久能知道审核结果?
不需要。成功通过小程序上传检测报告后,使馆工作人员会尽快审核您的申请,您无需再通过电话确认。
但是,请您密切关注健康码审核状态,如发现健康码变为红色,说明填报信息有误或检测报告不符合要求未能通过审核,请立即查看未通过审核的原因(如图),及时更正并重新提交申请。
特别提示:为避免影响您的行程,上传检测报告前请务必确认以下事项:
1、姓名、护照号、生日、直达中国航班出发地(应填写最后一个中转地,不能填写始发地)、直达中国航班出发日期(应填写最后一程航班登机日期)等信息是否填写准确;
2、请务必填写正确、有效的联系方式,以便必要时使馆工作人员能及时取得联系,以免耽误您的行程;
3、上传的检测报告截图或照片是否清晰完整;
4、检测报告上的姓名、性别、生日、证件号码等信息是否准确(如检测报告中的个人信息错误将不予通过审核,请尽快联系检测机构更正后重新上传)。
九、我预定了周一出发的航班,但社区医院周末不上班,拿不到检测报告怎么办?
目前冰岛社区医院一般可在24小时内出具检测报告,考虑到医院周末不上班,建议谨慎选择周一从冰岛出发的航班。请您在预定机票前务必与拟前往的社区医院联系,了解情况,合理安排行程,避免受周末或当地假日影响而导致无法按时取得检测报告或无法及时上传,影响您的行程并造成经济损失。
十、我的孩子是冰岛国籍,外国公民须凭《健康状况声明书》入境,是否意味着我的孩子可以申请签证,或持现有有效签证入境中国了?
不可以。2020年3月26日发布的《中华人民共和国外交部、国家移民管理局关于暂时停止持有效中国签证、居留许可的外国人入境的公告》仍有效。自2020年9月28日0时起,允许持有效中国工作类、私人事务类和团聚类居留许可的外国人入境,相关人员无需重新申办签证。入境后须严格遵守中国地方政府防疫管理规定。后续政策如有变动,我馆将通过官网和微信公众号及时公布最新消息,请及时关注。
十一、可从哪里了解健康码的申请步骤、注意事项和周边主要中转地中国使领馆相关信息?
1、您可以登录使馆官网(http://is.china-embassy.org/chn)了解最新公告;
2、您可以拨打驻冰岛使馆咨询电话进行咨询:+354-5276688(咨询时间:工作日9:00-12:00、14:00-17:00);或发送邮件至[email protected]进行咨询;
3、健康码申请步骤、注意事项及更多关于健康码的问题可参考:https://hr.cs.mfa.gov.cn/help_two/help-two/hs.html
4、您可访问冰岛周边主要中转地使领馆网站了解中转地更多信息:
驻丹麦使馆:https://www.fmprc.gov.cn/ce/cedk/chn/
驻法国使馆:http://www.amb-chine.fr/chn/
驻瑞典使馆:http://www.chinaembassy.se/chn/
驻法兰克福总领馆:http://frankfurt.china-consulate.org/chn/
⑦ 抗体检测怎么检测(核酸、抗原、抗体检测)
自 2020 年新冠疫情爆发以来,「核酸检测」作为一项检测是否感染的重要指标,开始反复出现在我们的生活中。2022 年 3 月 10 日,国务院应对新型冠状病毒肺炎疫情联防联控机制综合组发布通知,决定推进「抗原筛查、核酸诊断」的检测模式,在核酸检测基础上增加抗原检测作为补充。
抗原检测是什么?和其他的检测手段有什么不同?这篇文章,我们以新型冠状病毒为例,讲讲常见的快速筛查手段,聊聊相关的原理以及适用范围。
想要对一种疾病或是一种物质进行筛查,我们首先要弄清楚的就是「从何下手」的问题,其次是「如何检测」,让微观世界的变化反映到我们眼前,帮助我们作出判断。
我们面对的是病毒。根据大家耳熟能详的中学生物课知识,病毒是一类由遗传物质和蛋白质外壳组成的类生命体 。如果想对病毒的感染情况进行探测,就需要从它的组分下手。接下来的内容,希望大家带着自己中学的生物知识阅读。
以目前正在困扰我们的 SARS-CoV-2 为例。它属于冠状病毒科下,冠状病毒亚科的乙型冠状病毒属,是已知的第七种能够感染人类的冠状病毒。所有的冠状病毒都是具有 包膜 的 正义单链 RNA 病毒 ,也就是说,它们的遗传物质是一条单独的 RNA 链,并且这条 RNA 链可以直接作为 mRNA(信使 RNA)参与翻译,指导蛋白质的合成。
编号为NPRC 2020.00002的毒种,图片由国家病原微生物资源库(中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所)提供。
我们现在的目的是检测标本中是否存在这种病毒,无论是检测它本身,还是检测病毒带来的产物,能够下手的方向也就是两种:蛋白质外壳(包膜)、遗传物质。
顺着这个逻辑,那最显而易见的方法就是检查它「能不能看到」,但病毒本体小得很,SARS-CoV-2 的直径在 80-120 nm,要想每个标本都拿电镜过一遍是不现实的,人力物力和财力都撑不住。那么更经济实惠的方法,就是通过某些措施,让 病毒的组分 ,或是因为病毒而出现的 某些特殊物质 积攒到一定数量级后发光、变色,出现 宏观表现 。
那么我们的问题就转化成了,选择一种可以观察到宏观尺度变化的方法,和病毒的组分、病毒引发的某种物质产生关联。我们能选择的物质也摆在台面上:病毒的遗传物质,在这里是它的 RNA;病毒的包膜,也就是蛋白质外壳;以及,如果你还记得一些基础的生物知识,人体的免疫系统会在感染病毒之后产生抗体以抵抗入侵,它也是不错的选材。
我们目前采用的几种检测方式,也就从这些物质(以及它们的相关物质)脱胎而来,分别为针对遗传物质的核酸检测,针对包膜的抗原检测,以及针对抗体的血清抗体检测。
作为病毒的遗传物质,核酸序列载写了能够鉴定病毒为某一特定种的基因特征,因此核酸阳性,也就意味着病毒在体内存在过。
我们目前进行的「核酸检测」其实分为两个部分。平常我们进行的「捅鼻子」「捅嗓子」取样和后续的定性是第一部分。在取得标本之后,因为病毒量太少,样本会在实验室中进行一定次数的扩增,并根据荧光反应结果来判定阳性阴性。
第二部分,确定为阳性的样本,还需要通过基因测序,确定样本病毒的分型,以便溯源。这一步已经不属于日常筛查的范畴,但在流行病学调查上具有重大意义,如果有兴趣了解,可以参看 Wikipedia 简要了解。
我们平常参与的作为 筛查 工具的核酸检测,指的就是采集到定性的第一部分。
在感染了 SARS-CoV-2 之后,咽拭子、痰、下呼吸道分泌物、血液等标本中均可发现病毒核酸。不同部分标本核酸检测的阳性率有一定差异,随着病程进展,各个部位的检出率也会发生变化。
我们习惯称呼的「鼻拭子」与「咽拭子」,其实都是采集咽腔后壁的分泌物与组织,前者采集鼻咽,后者采集口咽。也有采用其他标准的,比如唾液等亦可作为检测标本,本质上也是不同地区规定有差异
鼻(咽)拭子与(口)咽拭子已经是综合了阳性率与便利程度的考量。粪便和尿液等其实也可以作为标本采集的对象。而且根据一项对 31 例患者的研究,肛拭子的准确率要高于鼻咽与口咽采样,尤其病程后期,肛拭子确诊病例的鼻拭子阳性率不到 30%。 4 但显然,由于操作的限制,它无法作为早期筛查的首选手段。
接下来的工作,就是从获取的那一点点标本中提取核酸。由于样本中病毒的数量级很小,不足以拿来分析,还需要将其扩增并标记。需要用到的同样是高中学过的知识:聚合酶链式反应(PCR)——这一步看起来麻烦,但由于它的原理和工序已经研究成熟,实际操作中只需要加好试剂送机器,整个核酸检测的过程里最麻烦的还是让待测者安安分分弄来标本(笑)。
各地疾控机构或检测中心会采购合适的核酸 提取试剂盒 与核酸 检测试剂盒 。提取试剂盒负责将 RNA 从混杂的样本(细胞碎屑、分泌物、灰尘等杂质)中提取出来,常见的有磁珠法、离心柱法和释放剂法,不同提取方法可能对后期检测的准确度略有影响 。之后,提纯出的 RNA 就会移交给检测试剂盒(也有一些试剂盒将两者合一),进行之后的工序。
检测试剂盒带着样本在机器中进行的过程,就是这个检测中最主要的反应:RT-qPCR(实时定量逆转录聚合酶链反应)。
接下来需要你捡起高中生物的知识。一般的 PCR 反应有以下几步:
加热:让双链 DNA 解旋变形,成为两条单链; 退火:让混合的单链 DNA 与根据需要复制的片段而设计好的引物结合; 延伸:调整温度,让 DNA 聚合酶顺着引物开始工作,复制出新链,形成新的双链。在对病毒的探测中,我们要做的工作也无非上面几步,只是需要多出两样东西:
在第一次反应之前,使用 逆转录酶 (依赖 RNA 的 DNA 聚合酶),合成病毒单链 RNA 的互补链,组合成 cDNA ; 在退火与延伸的阶段,除了引物和所需的酶外,还需要 TaqMan 探针 。你可以把 TaqMan 探针这样理解:它的主体部分是一段寡核苷酸链,被设计成能和一小部分需要复制的基因片段配对成双链的样子;它一端接了一个荧光分子,另一端接了一个开关(淬灭基团),两者和探针相连时,荧光就会被淬灭基团压制,探测不到。退火时,这个探针会和引物一起结合在要复制的单链片段上。在延伸的过程中,DNA 聚合酶会把挡在面前的障碍物切碎,其中就包括这段探针,淬灭基团和荧光分子就这样分离,荧光就表现出来。
随着循环数的增多,扩增的 DNA 片段和荧光也越来越多。对比每个循环的荧光亮度和前若干次循环的基准亮度,我们就能得出目前的 DNA 片段量,也可以直接用循环数和荧光亮度做定性的判断。
那么具体复制哪一部分呢?既然要探测病毒,那我们就选取最有代表性的核酸片段。现行的标准中,ORF 基因与 N 基因是常用的检测位点。
检测试剂盒负责的就是将提取出的 RNA(样本)投入后,根据试剂盒上的程序说明,设定对应的 PCR 温度与时长,由机器控制完成扩增过程,在固定的环节收集荧光信号,记录对应的循环数(Ct 值)。判断阴性阳性 / 是否还具有传染力的标准,就是看荧光信号达到阈值时,目前循环数是多少。根据目前现行的《新型冠状病毒肺炎诊疗方案(试行第九版)》,解除隔离管理的标准为 Ct 值 ≥ 35 。和此前通行的 ≥40 标准相比,出院与解除隔离的时间会大大缩短 。
经 RT-PCR 的核酸检测到现在都是确诊的金标准,因为它在方法学的角度看来,(理论上)可以做到 100% 准确。但核酸检测耗时长、对环境与操作人员要求高,在环境条件达不到标准、物资与仪器不齐全等情况下,大批量的核酸检测会带来巨大人力与财力消耗。
在本次疫情中,我们采用的免疫测定包括了快速抗原检测与抗体检测,它以 抗原-抗体反应 为基本原理,旨在通过抗原与抗体快速的中和效应,以较少的时间成本探测样本中是否存在待测物。两者都属于免疫层析法的范畴。
以盒装方式出现、可以自行操作的抗原检测就很适合作为物资不足、自我测定等情况下的补充。
核酸检测检查的是病毒的(标志性)遗传物质,是病毒的「内里」。那么(快速)抗原检测检查的就是病毒的「外在」,直接检查完整的病毒颗粒。目前通过审批的抗原检测试剂盒包括三种类型:胶体金法、乳胶法、荧光免疫层析法。三者内在原理一致。但其中荧光免疫层析法试剂盒仍然需要专用的检测仪或紫外线手电,不适合家庭自测;胶体金法和乳胶法则都是将检查结果转化成肉眼可见的条带,差别在于用于标记上色的物质不同。
当然,抗原检测自然有它的劣势在,它的 假阴性率 (是阳性但显示阴性)要更高,可能导致漏检错检。但放在一杯茶就能出结果的时间优势面前,准确性上的差距在某些特定情况下可以暂时让步。
图源:How the SARS-CoV-2 EUA Antigen Tests Work | ASM.org
和核酸检测相比,抗原检测增加了「鼻拭子」这一采样途径,降低了个人自测的难度。拭子上的样本在缓冲液中洗脱,取液体滴加在加样孔后,液体会因为毛细作用,带着潜在的抗原,经过一片预载了抗体的区域(结合垫,conjugate pad)。
这片区域上的抗体,是抗目标抗原(SARS-CoV-2)的单克隆抗体,每一个抗体分子都和特别的标记结合,它们与样本中的抗原发生反应,形成抗原-抗体复合物,并随着毛细作用向下一条带流去。
紧接着经过的是检测线(T 线,test line),在检测线上附着的同样是抗目标抗原的单克隆抗体,你可以理解成这里的东西和结合垫上的一样,只是没带标记。此时,如果受测者已经感染了 SARS-CoV-2,他留在样本中的抗原形成的抗原-抗体复合物,会在此处与固定在线上的抗体再次结合。在这里,这些带着标记的复合物不断沉积,最终会显示出一条或深或浅的条带。条带的颜色来源,就是之前结合垫上的抗体分子附着的标记,在胶体金法中是胶体状态的金颗粒,在乳胶法中是上色的乳胶滴,在荧光法中是荧光分子。所以你在使用这类试纸时,会发现刚刚加样结束,液体刚开始扩散的时候,扩散的最前端会有一点点很淡的颜色不断推移,这就是还没有固定沉积的标记的颜色。
接下来,液体继续扩散,经过质控线(C 线,control line),在质控线上附着的是另一种抗体——『抗「抗目标抗原的单克隆 抗体 」 的 单克隆 抗体 』,简称「 二抗 」。这种新的抗体是让上一种抗体在另一种动物的免疫系统中反应得来的,比如结合垫的抗体来自兔,那这里的抗体就来自羊,是羊抗兔的单克隆抗体。也就是说, 二抗的抗原是 之前在 结合垫上的抗体 。这条线就是为了检测液体有没有正常扩散、结合垫上的抗体有没有失效等等而存在的。此时,液体中剩余的大量来自结合垫的抗体就会作为抗原,与质控线上的二抗发生抗原抗体反应,形成复合物,显出一条明显的条带。
由于结合垫上的抗体非常充裕,这条质控线条带会出现得非常快、非常显色,而检测线由于抗原(病毒)数量不一定,显色速度会有差别,但一般在 15 分钟内就足够判断结果。所以不要看 C 线很明显,T 线隐隐约约就觉得「没事了」, T 线不管深浅,只要有,就是阳性 。
具体操作方面,可以参考医政医管局发布的 教学视频。目前国家也在逐步推广抗原自测试剂盒,在一定程度上可以减轻未来医疗与街道的压力。
除了前两种检测手段外,还有一种使用不太多,但同样重要的检测方法,就是同属免疫测定方法的「血清抗体检测」。
抗体检测采用的试剂盒与抗原检测非常接近,但标本的限制更大——由于检测的对象变成了抗体,标本就必须是明确有抗体存在的血液(或血浆、血清)。而且人体在初次感染病毒后,并不会第一时间内产生抗体。抗体能够明确达到被检测的数量级,一般是在初次感染(或接种疫苗)的一到两周之后。这些条件限制了抗体检测不能作为确诊性质的检查。目前,血清抗体检测仅作为一定情况下检查疫苗是否生效,或查验受测者近期是否感染过新冠病毒的方法。
在人体中有五种抗体,分别是 IgA、IgD、IgE、IgG 和 IgM。IgA 主要负责黏膜免疫。IgD 与免疫反应激活有关。IgE 抵御寄生虫,同时也参与过敏反应。剩下的 IgG 与 IgM 就是对抗病原体的过程中,免疫系统派出的主力军。
SARS-CoV-2 作为病原体,人体经刺激主要分泌的就是 IgG 与 IgM 两种。现有的抗体检测试剂盒,主要也是针对人体对 SARS-CoV-2 的 N 蛋白(核衣壳蛋白)或 S 蛋白(刺突蛋白)产生的 IgG 与 IgM。
抗体试剂盒的检测装置外观和抗原检测别无二致。二者的差别就是上文中提到的结合垫、检测线、质控线上附着的物质。
这次,加样孔中滴入的样本可能有对 SARS-CoV-2 的抗体。因此,结合垫上就应当是带了标记物的抗原——当然不可能放活病毒上来。一般这里使用的都是设计检测的抗原蛋白,比如前文提到的 N 蛋白或 S 蛋白,或是重组病毒,无论是哪种,它都必须包含受体结合域(RBD)作为抗体结合的靶点。在检测线上,附着的就是抗 IgM 或抗 IgG 抗体,以捕获结合了抗原的抗体蛋白。最后,质控线上附着抗原的特异性抗体,捕获剩余的游离抗原。
总的说来,三种检测方式针对的是不同的需求,互有优势,互相补充。核酸检测作为金标准,直接查验病毒的 RNA,负责看被检者带不带病毒;抗原检测作为快速检测方法,查的是病毒的蛋白质,但准确度不如核酸检测,对传染力强的感染者更有效;抗体检测查的是疫苗有没有生效、人近期有没有感染过病毒。
近期,新冠疫情在各地卷土重来。Omicron 变种与此前流行的 Delta 变种相比,虽然病死率与重症率明显下降,但潜伏期更短,病毒复制速度更快,传染力明显增强。希望大家在这样的环境中保持健康。
⑧ 什么是抗血清检测法
植物病毒是一种由核酸和蛋白质组成的抗原,当把经过纯化的某种已知病毒注射到脊椎动物体内后,就会产生一种相应的抗体。
抗体主要存在于血清中,含有抗体的血清称为抗血清。注射到动物体内的病毒不同,所产生的抗血清也不同。
抗原和抗体之间能发生高度专一性的免疫反应,借助这种反应,就可用已知病毒的抗血清鉴定未知病毒的种类。其方法之一是将待测植株的一滴汁液加到几种不同的抗血清中,在哪一种抗血清中出现沉淀,就证明该植株带有哪一种病毒。
这个过程在很短时间内即可完成。因此,病毒的抗血清鉴定法既灵敏又快捷,是目前常用的一种病毒检测方法。