A. 我要提問,我想請問的是熒光定量PCR檢測支原體DNA,CT值27,39,結果呈陽性代表的是什麼,有哪為網友知道請
一般來說,熒光定量PCR反應,CT值結果在18-24之間是比較好的結果,CT值大於24小於30左右也是可以接受的結果,CT值大於35以後基本可以認為該PCR反應沒有擴增產物,你的實驗結果27的那個CT值還可以用,39的那個說明根本就沒有擴增產物,你可以從溶解擴增曲線上看一下,如果實在不放心可以把PCR產物跑一個瓊脂糖凝膠電泳。對於你27的那個結果,優化一下體系條件,應該可以得到比較好的結果
B. 細胞支原體感染 檢測試劑盒 怎麼檢測
支原體檢測試劑盒操作步驟:
貼壁細胞:
1.被檢細胞接種於無菌的6孔細胞培養板中,接種密度為1-2×104。同時,接種正常無支原體感染的同種細胞,作為陰性對照。
2.5天後,先吸去培養液,再加入1ml的固定液,靜置20min,
3.吸去固定液,晾乾。
4.於每孔中,加入1ml的Hoechst33258工作液(Hoechst33258工作液須覆蓋全部被檢細胞),37℃避光放置15-20min或室溫靜置20~30min。
5.吸去Hoechst33258工作液,加入2ml滅菌超純水洗滌三次,直接風干。風干後加入一滴封片液,並以蓋玻片覆蓋。
6.熒光顯微鏡觀察。用紫外激發光激發,觀察細胞周圍是否有藍色熒光小點或串珠狀熒光小點。
懸浮細胞:
1.收集需檢測的細胞,1500rpm,5min。
2.將收集的細胞塗片於載玻片上,再加1ml的固定液,靜置20min。
3.吸去固定液,晾乾。
4.於每孔中,加入1ml的Hoechst33258工作液(Hoechst33258工作液須覆蓋全部被檢細胞),37℃避光放置15~20min或室溫靜置20~30min。
5.吸去Hoechst33258工作液,用無菌水洗滌玻片3次,直接風干。風干後加入一滴封固液,並以蓋玻片覆蓋。
6.熒光顯微鏡觀察。用紫外激發光激發,觀察細胞周圍是否有藍色熒光小點或串珠狀熒光小點。
結果判斷(參考):
陰性:僅見細胞的細胞核呈現黃綠色熒光。
陽性:除細胞外,細胞周圍可見大量的大小均一的熒光著色顆粒。
注意事項:
Hoechst工作液對人體有害,請注意防護。
固定液有刺激性氣味,建議在通風櫥進行固定。
支原體檢測時,最好用不含抗生素的培養液培養2~3代,這樣容易避免假陰性結果。
檢測支原體污染,可以使用支原體高效Vero細胞,這樣可以提高檢測靈敏度,即將被檢測樣品接種於Vero細胞進行檢測。