① 豬病常用的血清學診斷方法有哪些
抗原和相應的抗體在動物體內或體外都能發生特異性結合反應,這種反應稱為抗原抗體反應,習慣上把體內的抗原抗體反應稱為免疫反應,體外的抗原抗體反應稱為血清學反應,因為抗體主要存在於血清中。
血清學反應可以用已知的抗體檢查未知的抗原,也可用已知抗原測定未知的抗體。人們根據抗體能與相應抗原發生反應並出現可見的抗原—抗體復合物的原理,設計了許多血清學診斷方法,不僅可以檢測動物體內乃至體外的病原微生物,或其抗原性成分,而且還可以測定動物機體對病原微生物的侵襲或對其抗原成分的免疫反應。在抗原—抗體復合物成不可見狀態時,可以通過瓊脂擴散、凝集實驗以及酶標記等指示系統,使其變為可見或可測狀態。
目前已知的血清學診斷方法很多,現僅介紹幾種在目前條件下規模化豬場通過學習都能做到的診斷方法:
(1)凝集試驗豬病診斷過程中常用的操作方法有以下幾種:
①全血平板凝集試驗實踐中主要用於細菌性疾病的抗體檢測和抗原(經分離培養後)的鑒定。現舉例用已知豬丹毒抗原(丹毒桿菌的純培養液)測定被檢豬血清中的抗體。其操作步驟如下:
a.材料豬丹毒凝集抗原,玻片,9號針頭,酒精棉球,酒精燈,鉑耳(取血環)等。b.操作用鉑耳取已知抗原1滴,置於玻片上。用酒精棉球擦拭針頭,鉑耳在酒精燈上灼燒消毒。用針頭刺破被檢豬的耳靜脈,以鉑耳取血與玻片上的抗原等量混合,在2~3分鍾內觀察結果。c.結果判定出現顆粒狀的凝集,為陽性反應。否則為陰性。
②試管凝集試驗是一種定量法,用於測定被檢血清或其他體液中有否某種抗體及其效價,可做臨床的輔助診斷,或用於流行病學監測。在豬場中,本法常用於豬布氏桿菌病的診斷。
A.材料布氏桿菌病試管凝集抗原(1∶20倍稀釋),布氏桿菌病陽性血清、陰性血清(1∶25倍稀釋),稀釋液(0.5 %石炭酸生理鹽水),滅菌小試管,1毫升吸管,試管架,待檢血清等。B.操作取試管7支置於試管架上,設陽性和陰性血清及抗原對照各1支,測定管4支,以後每增加1個樣品,只需增加4支測定管。
按表10示意稀釋血清,加抗原,完成後每支試管內應含1毫升液體。
② 規模化養豬場做抗體水平檢測如何有效采樣
眾所周知,經過高度選育的豬群對疾病特異和非特異抵抗的免疫記憶逐代減少,有限的空間和較高的飼養密度進一步加劇了豬群抵抗力的降低,一旦傳染病爆發將帶來沉重的打擊,因此豬群健康問題是規模化養豬業發展的主要障礙,
豬場的防疫工作是當前規模化養豬工作中重點。
豬群的疫苗免疫是防疫傳染病的有效途徑,免疫檢測是判斷和評估豬群免疫效果的主要手段。對一個養豬場的免疫效果做出科學的評價,首要的問題就是要做到有效采樣,涉及到以下幾個方面:
采樣要有一定數量,才有統計學意義,采樣品數量太少,不足以代表整個養豬場的抗體水平,樣品數量多,不經濟。根據統計學一般規律,采樣量20頭時可信度可達98%,30頭時可信度達99%,40頭時可信度達到99.5%,50頭時可信度達到99.9%,因此我們建議每個階段分別至少採樣30頭,就基本上可以代表整體水平。由於考慮到種公豬的特殊重要性,我們要求每頭公豬都需要采樣。
采健康的豬,不採病豬,同時也要保證是隨機采樣,保證各個胎次都比較均衡。采血時候盡量避免污染,采血部位用酒精棉擦拭消毒,采血量至少2毫升,才能保證析出來足夠量的血清用於檢測。採集的樣品標記要清楚,編號要有規律,樣品的排列要有順序,便於檢測,統計結果。採集樣品裝放有冰袋的保溫盒及時送到實驗室,在運送途中盡量避免搖晃,以免溶血。採集的樣品要有詳細的說明,包括:日齡,胎齡,豬群種類,健康狀況,最後免疫時間和疫苗的來源等數據。
我們建議有條件規模化豬場一年可以檢測2次,如果有很好的條件可以每年檢測4次。
③ 豬場中,什麼是抗體監測和凈化。該怎麼做
抗體監測,是利用血清學方法,現在常用ELISA檢測試劑盒,對豬場的不同群體、不同階段的豬,進行每個季度1次的血清抗體常規監測,通過分析群體抗體滴度、群體離散度和群體轉陽率,綜合評價豬群整體免疫效果和穩定性,從而進行疫病預警和免疫等工作的調整。
凈化,是通過一系列的方法(免疫、監測,封群、馴化、自繁自養、全進全出等生物安全措施方法),將豬場中存在的某種致病因子去除,達到豬場中不再有某種疫病的存在。
針對不同的豬場、不同的疫病,採用不同的監測和凈化方案。
④ 豬蘭耳抗體KQ值是什麼意思,多少是合格
KQ值就是S/P值,只是多乘以100。以使用科前生物公司ELISA試劑盒(間接ELSIA法)檢測豬血清中的藍耳病病毒抗體為例,僅當陽性對照OD630 nm≥0.7,陰性對照OD630 nm<0.3時試驗成立,計算KQ 值。KQ=(樣品OD630 nm÷ 陽性對照OD630 nm 平均值)×100,當KQ≥20,判定為抗體陽性,KQ<20,判定為抗體陰性。
需注意兩點:(1)該試劑盒必須在陰、陽性對照實測值符合規定的條件下,才能計算待測樣品的KQ值,否則結果無意義。(2)任何公司生產的任何檢測產品,甚至對於不同檢測對象,判定方法及依據可能不同,沒有絕對的正確或錯誤,最好結合多種檢測方法、多次檢測再下結論為宜。
比如說,這里假設陽性對照血清OD630實測值等於0.80,陰性對照血清OD630實測值等於0.25,而某待測血清樣品的OD630等於0.20,便可依據0.20/0.80*100=25>20判定待測血清樣品抗體為陽性。然而,當考慮到該待測血清樣品的OD630=0.2卻小於陰性對照的情況,剛才所做出的判定可能有誤,即該份待測血清樣品很可能是抗體陰性。