① HIV抗體檢測要做多久
艾滋病病毒進入人體後,人體免疫系統可以產生相應的艾滋病病毒抗體。檢測血液中的艾滋病病毒抗體是目前最常用的確診艾滋病病毒感染的實驗室方法。那麼, HIV抗體檢測要做多久 ?
1、酶聯法 :即“酶聯免疫法”,簡稱ELISA。它的中心就是讓抗體與酶復合物結合,然後通過顯色來檢測。步驟很簡單:ELISA用血清來檢測,首先血液要經過至少半個小時的凝集,然後取血清。將酶復合物用稀釋液稀釋後,加血清及陰性、陽性對照,還有質控品。經過一個小時的孵育,然後洗板,加底物,半個小時避光反應後加終止液即完成反應部分,然後讀數。由數值來判斷結果的陰性或陽性。
嚴格的講,如果第一次檢測為陽性的話,無論是哪個實驗室,必須按照CDC的HIV操作規程來進行第二次檢測,第二次的方法必須與第一次的不同,如還是陽性,將送艾滋病確認實驗室確認。
2、快速法 :即“金標法”,又叫“膠體金法”,金標法是國際上較為先進的靈敏,特異,快速,簡便,准確率高的體外診斷方法。測定結果僅憑特製的檢測試紙在短時間內即可獲得。金標法(艾滋病檢測試紙),取血後滴在試紙上,用15分鍾的時間觀察該試紙有無顏色變化。
艾滋病快速檢測法可以在家裡自己檢測,操作簡單方便,不需要特殊的儀器,在艾滋病試紙上先滴兩滴血,再滴一滴稀釋液,然後等待15分鍾讀取結果。結果判讀也很簡單,如果試紙上出現一條紅色的直線,說明是陰性,如果是兩條紅線,就是陽性。如果檢測出現陽性,按照HIV檢測流程,需要進行復測。
使用快速法(艾滋病試紙)進行艾滋病自我檢測應該在專業人員指導下進行,以確保整個自測操作過程規范正確,結果准確可靠。
3、蛋白免疫印跡法(WB)
艾滋病確診實驗室常用的方法,主要用於確認試驗,當初篩出現陽性時,需採用此方法進行確認實驗。基本原理是HIV全病毒抗原經過SDS-PAGE電泳,將分子量大小不等的蛋白帶分離開來,然後再把這些已經分離的不同蛋白帶電轉移到硝酸纖維素膜上。將此膜切割成條狀,每一條硝酸纖維素膜上均含有經電泳分離過的HIV病毒抗原。將待檢血清樣品用稀釋液稀釋成1/100,再把它直接加到硝酸纖維素膜上,恆溫震盪,使其充分接觸反應。血清中若含有抗HIV抗體,就會與膜條上的抗原帶相結合。加入抗人IgG酶結合物和底物後,即可使有反應的抗原抗體結合帶呈現紫褐色,根據出現條帶情況判定結果。
1、HIV檢查需要空腹嗎
HIV檢查是定性試驗而非定量試驗,不受飲食和葯物的影響,因而檢測前不需要空腹、禁食。 另外,艾滋病病毒抗體的檢測是特異性的,而且抗體水平不受體溫、葯物等的影響。因此,一般性的生病、服葯不會影響艾滋病病毒抗體檢測結果。
2、HIV檢查能喝水嗎
HIV檢查能喝誰。HIV檢查是指採用實驗室方法對人體血液、其他體液、組織器官、血液衍生物等進行病毒以及抗體相關指標檢測,喝水吃飯都沒有影響。
3、HIV檢查多久出結果
HIV檢查分為初篩和確證兩個步驟。初篩酶聯免疫試驗需要大約兩到三個小時,如果用快速試劑進行初篩檢測,則可以在半小時之內出結果。初篩試驗結果陽性就需要做進一步復檢和確證,確證檢測的時間是一到兩天。但以上僅僅是試驗本身的時間,具體操作時還需考慮標本運送時間和各個試驗室的工作安排,各個實驗室的情況不一樣,很難有統一的標准。在傳統檢測中,收集到的樣本要送到一個中心實驗室進行檢測,這種方法可能會要求孕婦一周後或更長時間後回來看結果。
1、檢測前半小時應適量飲水避免血液過於粘稠。
2、准備好:酒精,葯棉,計時器,並用用清水和肥皂洗干凈雙手。
3、檢測應在室溫4度以上進行操作;扎針取血前應該先用酒精消毒采血部位(一般是手指),然後按摩,促使血液流通。
4、出血後,可輕輕擠手指,將受檢血液滴入加樣孔,一般用3滴血。
5、滴入血液後10秒,滴入1滴緩沖液就足夠了,此時開始計時。(如果血液足夠順利到達檢測C區可不加緩沖液)
6、加樣後15分鍾可以觀察結果,一條線為陰性,二條線為陽性,超過30分鍾結果不準確。(15-30分鍾結果最准確。)
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② 艾滋病抗體的檢查方法
艾滋病病毒抗體檢測
艾滋病病毒抗體檢測:檢測血液中的艾滋病病毒抗體是目前最常用的檢測艾滋病病毒感染的實驗室方法,一般要經過兩個步驟:首先做初篩試驗,如果為陽性,再做確認試驗,確認試驗陽性才可診斷為艾滋病病毒感染。
常用的方法有:
1病原檢測病原檢測主要指用病毒分離培養、電鏡形態觀察、病毒抗原檢測和基因測定等方法從宿主標本中直接檢測病毒或病毒基因。由於前兩種方法難度大,且需要特殊設備和專業技術人員。因此僅抗原檢測和RT-PCR(反轉錄-PCR)可用於臨床診斷。
2 抗體檢測血清中HIV抗體是判斷HIV感染的間接指標。根據其主要的適用范圍,可將現有HIV抗體檢測方法分為篩檢試驗和確證試驗。
3 確證試劑篩檢實驗陽性血清的確證最常用的是Western blot(WB),由於該法相對窗口期較長,靈敏度稍差,而且成本高昂,因此只適合作為確證實驗。隨著第三代和第四代HIV診斷試劑靈敏度的提高,WB已越來越滿足不了對其作為確證實驗的要求。FDA批準的另一類篩檢確證試劑是-免疫熒光-試驗(IFA)。IFA比WB的成本低,而且操作也相對簡單,整個過程在1-1.5小時內即可結束。此法的主要缺點是需要昂貴的熒光檢測儀和有經驗的專業人員來觀察評判結果,而且實驗結果無法長期保存。現在FDA推薦在向WB不能確定的供血員發布最終結果時以IFA的陰性或陽性為准,但不作為血液合格的標准。
4篩檢試驗篩檢試驗主要用於對供血員進行篩查,因此要求操作簡便,成本低廉,而且靈敏、特異。目前世界上主要的篩檢方法仍然是ELISA,還有少數的顆粒凝集試劑和快速ELISA試劑。ELISA有很高的靈敏度和特異性,操作簡單,僅需要實驗室配備酶標儀和洗板機即可應用,特別適合於試驗室大規模篩檢使用。顆粒凝集實驗是另一種操作簡單方便,成本低廉的檢測方法,該方法結果可通過肉眼判定,靈敏度很高,特別適合發展中國家或大量篩選供血員時使用,缺點是必須使用新鮮樣品,特異性較差。80年代後期發展起來的斑點印跡檢測(Dot-blot assay)是一種快速ELISA(Rapid ELISA)方法,這種方法操作極為簡便,過程短暫,整個過程多數在5-10分鍾內甚至3分鍾內即可結束,但該法比ELISA和顆粒凝集試劑昂貴得多。金免疫測定是以膠體金為標記物,以硝酸纖維素膜為載體的固相免疫測定,分為滲濾和層析兩種形式。用於HIV抗體檢體金試紙條屬於金免疫層析,且大多數為間接法及雙抗原夾心法,兩種方法各有優缺點,但都簡單而快速,數分鍾即可得出結論,不需儀器設備,操作人員不需特殊訓練,試劑穩定,適用於單份測定等。
③ 血站是用什麼方法檢測HIV抗體的
HIV-抗體檢測方法
常見檢測方法
目前作為診斷手段使用的檢測主要包括抗HIV病毒抗體檢測、病毒培養、核酸檢測和抗原檢測。其中對病毒抗體的檢測是最常規使用的方法,這不但是由於這類檢測特異性、敏感性較高,方法相對簡便、成熟,更重要的原因是HIV抗體在病毒感染後除早期短暫的」窗口期」外的整個生命期間長期穩定地存在並可被檢測到。在一些特殊情況下,當抗體檢測無法滿足HIV感染診斷的需要時,病毒分離及測定、核酸檢測、抗原檢測可作為輔助手段使用,這包括對非典型血清學反應樣品的診斷、HIV感染的窗口期診斷、新生兒早期診斷和對特殊樣品的診斷。 一、 酶聯免疫吸附試驗(ELISA)
目前應用的ELISA法有8種之多。它們的特異性和敏感性超過99%。
二、 顆粒凝集法(PA)
PA為快速、簡便的一種篩選方法。如屬陽性,應經WB證實。PA不需任何特殊儀器,其結果用肉眼可判別。全過程僅需5分鍾。缺點有假陽性,且價格昂貴。
三、快速試劑
(一)人類免疫缺陷病毒(HIV)1+2型抗體診斷試劑(膠體硒法)
雅培人類免疫缺陷病毒抗體診斷試劑(膠體硒法)是用於體外,肉眼觀察,定性的免疫分析,檢測血清或血漿中的HIV-1和HIV-2抗體,用於幫助受感染個體的HIV-1和HIV-2抗體。本品僅用於無償獻血員現場初篩及臨床緊急情況的使用,本品檢測陽性者,需進行進一步篩查確認。
(二)InstantCHEKTM-HIVl+2金標快速診斷試劑
InstantCHEKTM-HIV1+2是一種快速、簡單、靈敏的檢驗方法, 用以檢測艾滋病病毒(HIV-1和HIV-2)的抗體。該方法適用於初篩檢測,凡由該試劑測定為陽性者,需用另一種方法檢測如ELISA或用蛋白印記法確定。
四、HIV-抗體確認實驗
免疫印跡試驗(WB)、條帶免疫試驗(LIATEK HIVⅢ)、放射免疫沉澱試驗(RIPA)及免疫熒光試驗(IFA)。國內常用的確認試驗方法是WB。
(一_免疫印跡實驗(westernblot,WB)是廣泛用於許多傳染病診斷的實驗方法,就HIV的病原學診斷而言,它是首選的用以確認HIV抗體的確認實驗方法,WB的檢測結果常常被作為鑒別其他檢驗方法優劣的「金標准」。
確認試驗流程:
有HIV-1/2混合型和單一的HIV-1或HIV-2型。先用HIV-1/2混合型試劑進行檢測,如果呈陰性反應,則報告HIV抗體陰性;如果呈陽性反應,則報告HIV-1抗體陽性;如果不滿足陽性標准,則判為HIV抗體檢測結果不確定。如果出現HIV-2型的特異性指示條帶,需用HIV-2型免疫印跡試劑再做HIV-2的抗體確認試驗,呈陰性反應,報告HIV-2抗體陰性;呈陽性反應則報告HIV-2抗體血清學陽性,並將樣品送國家參比實驗室進行核酸序列分析,
WB的敏感性一般不低於初篩實驗,但它的特異性很高,這主要是基於HIV不同抗原組分的分離以及濃縮和純化,能夠檢測針對不同抗原成分的抗體,因而能夠用WB方法鑒別初篩實驗的准確性。從WB確認試驗結果看出,初篩試驗盡管選擇質量較好的試劑,如第三代ELISA,仍會有假陽性出現,必須通過確認試驗才能得出准確結果。
(二)免疫熒光實驗(IFA)
IFA法經濟、簡便、快速,曾被FDA推薦用於WB不確定樣品的診斷。但需要昂貴的熒光顯微鏡,需要受過良好訓練的技術人員、觀察和解釋結果易受主觀因素的影響,結果不宜長期保存,IFA不宜在一般的實驗室開展和應用。
④ 抗體檢測需要空腹嗎
我們在體檢的時候,經常要求空腹去檢查,醫生都會要求空腹,空腹檢查是為了檢驗的真實性,吃飯會影響血液中各項指標的值,那麼,很多朋友在檢查丙肝抗體的時候,也會非常關心是否需要空腹去進行,提醒:丙肝抗體檢查和人體代謝沒有直接關系,是不需要空腹的。
丙肝抗體檢查和乙肝抗體檢查是不一樣的,乙肝抗體是一種保護性抗體,乙肝抗體陽性是一種好的表現。而丙肝抗體不是保護性的,是免疫系統攻擊丙肝病毒的產生的,需要結合肝功能以及肝臟B超等檢查結果,確定是否感染丙肝,所以檢查肝功能和B超是需要空腹的,所以還是建議空腹檢查。
丙肝抗體檢查需要空腹嗎?是否感染丙肝,只檢查一項丙肝抗體,丙肝抗體陽性是不能夠證實感染丙肝的,丙肝抗體只能證明人體感染過丙肝病毒,但是免疫系統不斷攻擊丙肝病毒,過一段時間病毒也可能會被殺死完,所以抗體存在但是人不一定是丙肝。
所以檢查是否感染丙肝一定要檢查丙肝病毒,如果丙肝病毒數量大,且帶遺傳物質,則能確診丙肝。所以檢查丙肝還是需要空腹的。
丙肝抗體檢查出陽性後,說明人體曾經或限制感染了丙肝病毒,丙肝病毒刺激人體產生了抗體,因此要進一步的檢查血液中的是否有病毒,建議患者確診丙肝不要單一檢查丙肝抗體,一定要結合丙肝病毒,肝功能等檢查,一旦檢查出,立即治療,科學的治療是健康的前提,任何疾病早發現早治療都是非常好的,一定不要等到症狀出現了明顯異常才去重視治療。
⑤ 乙肝抗原抗體檢測實驗的主要步驟
① 取出包被好的板,加入待測血清,再加入酶標記抗體,置濕合37℃30-45min
② 取出以洗滌劑洗滌3次,每次3-5min
③ 加入顯色液,置於37℃保溫箱15-30min
⑥ 冰島新冠病毒核酸檢測及血清抗體檢測常見問題解答
從冰島乘坐飛機回到中國在登機前48小時內完成新冠病毒核酸檢測和血清特異性IgM抗體檢測,然後憑檢測雙陰性證明申領帶「HS」標識的綠色健康碼或「HDC」標識的健康狀況聲明書二維碼登機。下文是對檢測中相關問題的解答。
自11月7日起,自冰島搭乘航班赴華的中、外籍乘客須於登機前48小時內完成新冠病毒核酸檢測和血清特異性IgM抗體檢測,然後憑檢測雙陰性證明申領帶「HS」標識的綠色健康碼或「HDC」標識的健康狀況聲明書二維碼登機。航空公司在乘客登機前予以查驗。駐冰島使館現就大家比較關心的問題說明如下:
一、在冰島如何預約新冠病毒核酸檢測和血清IgM抗體檢測?
在冰島進行新冠病毒核酸檢測和血清IgM抗體檢測時,請您提前同住所附近的社區醫院聯系,預約進行核酸檢測和血清IgM抗體檢測采樣,社區醫院的分布及纖裂聯系方式可在冰島健康中心網站查詢(https://www.heilsuvera.is/en/map/),社區醫院一般會在采樣後24小時內出具檢測報告。請您在預約時向社區醫院說明相關檢測報告將用於國際旅行,並告知其出發時間,院方會據此盡快為您安排采樣並及時出具檢測報告。
特別提示:檢測費用自理。
二、注意到乘機回國須於登機前2天內完成核酸、血清IgM抗體采樣、檢測的要求,核酸檢測時限縮短了,毀顫閉還增加了血清抗體檢測,上述要求出於什麼考慮?
近期,全球新冠肺炎疫情反彈明顯,多國爆發「第二波」疫情並收緊防疫措施,國際旅行時面臨更大健康和安全風險。
中國駐外使領館結合疫情形勢發展變化,近期調整了搭乘航班赴華人員登機前核酸檢測的時限,並增加血清抗體檢測要求,提出上述要求的目的是為了降低疫情跨境傳播風險。建議您堅持「非必要,不旅行」原則,盡量避免跨境旅行,並做好疫情防控。
三、我要從冰島經丹麥中轉回國,該怎麼申領健康碼?
對於自冰島出發,經第三國中轉赴華的中國乘客,需在離冰前往中轉地航班起飛前48小時內進行新冠病毒核酸及血清IgM抗體檢測,並取得兩項檢測的雙陰性證明(以下簡稱「雙陰性證明」)。憑借雙陰性證明,乘客向中國駐冰島大使館申領帶「HS」標識的綠色健康碼(HS碼)後,方可乘機前往中轉地。抵達中轉地後,在赴華航班起飛前48小時內,乘客需在中國駐中轉地使領館認可的檢測機構再次進行新冠病毒核酸及血清IgM抗體檢測,並取得兩項檢測的雙陰性證明。乘客憑借雙陰性證明向中國駐中轉地使領館申領健康碼(HS碼)後,方可乘機赴華。
例如,中國公民王先生擬搭乘12月3日(周三)的航班從冰島前往哥本哈根,再乘坐12月5日(周五)的航班前往中國。王先生需要12月1日在冰島進行新冠病毒核酸及血清IgM抗體檢測,並憑雙陰性證明向我館申領健康碼,方可乘機前往哥本哈根。王先生抵達哥本哈根後,需在赴華航班起飛前48小時內再次進行新冠病毒核酸及血清IgM抗體檢測,並憑雙陰性證明向中國駐丹麥使館申領健康碼登機。同時,根據目前作法,在丹麥轉機的乘客也可直接持雙陰性證明登機。
特別提示:冰島社區醫院一般可在采樣後24小時內出具檢測結果,但為避免因特殊情況導致未能及時出具檢測報告,請您預約核酸檢測時務必向院方說明檢測報告將用於國際旅行,請其盡快出具檢測報告。由於審核需要時間,為避免給您自身帶來不便,請在取得檢測報告後立即上傳。若因申請人上傳過晚導致未能及時審核,責任自負。
中國駐各國使領館對新冠病毒核酸檢測和IgM抗體檢測結果遠端申報要求不盡相同。建議乘客密切關注各有關使領館網站,准確掌握最新要求。請務必提前詳細了解中轉地入境、防疫、檢測等相關信息,選擇合適的中轉航班,以免造成拒絕入境、滯留等不良後果。
乘客在獲得健康碼後,請嚴格自律,加強自我防護,切勿鬆懈,避免前往人口密集場所等感染高風險地區,以負責任態度保護自己、家人和即將同機旅行的其他乘客。
四、我從冰島出發,可否購買轉機直達北京的機票?
不能。根據中國有關部門要求,從奧地利維也納、丹麥哥本哈根、瑞典斯德哥爾摩、希臘雅典、加拿大溫哥華、泰國曼谷、柬埔寨金邊、巴基斯坦伊斯蘭堡和卡拉奇等城市直達北京的航班僅向該國公民和居住在該國的中國公民開放,冰島等洞空其他國家居民無法登機,請勿冒險嘗試經過上述城市轉機赴京,以免旅途遇阻滯留。上述航線可能隨時發生變化,請密切關注中國國際航空公司等有關航司官方網站最新信息。
五、我年紀大,不會使用微信,更不會申請健康碼,但又必須回國,該怎麼辦?
針對不會使用微信的中老年人或嬰幼兒,健康碼國際版小程序中特加入「為他人填報檢測情況」這一功能。您可請家人、朋友為您填報檢測情況,成功申請健康碼後,憑列印出的有效健康碼圖片或手機截圖登機。
六、我的檢測報告上有多個日期,上傳檢測報告時「檢測采樣日期」一欄應填寫哪個日期?
應填寫檢測報告的采樣日期。請勿填寫報告出具日期或報告列印日期,詳見下圖。請務必仔細瀏覽檢測報告並認真准確填寫報告采樣日期。
七、健康碼的有效期是從上傳核酸檢測報告到小程序的時間起算嗎?
不是。健康碼的有效期是從檢測報告的采樣日期起算。例如,您核酸檢測報告和血清IgM檢測報告上顯示的采樣日期為12月1日,但您12月2日才將該檢測報告上傳到小程序,那麼審核通過後您核酸碼的有效期仍是從12月1日起開始計算。如兩項檢測非同一天進行,采樣日期則填寫較早采樣檢測的采樣信息。例如,您核酸檢測報告采樣日期為12月1日,血清IgM抗體檢測采樣日期為12月2日,那麼,上傳的采樣日期應為12月1日。
八、通過小程序上傳檢測報告後我還需要打電話確認嗎?多久能知道審核結果?
不需要。成功通過小程序上傳檢測報告後,使館工作人員會盡快審核您的申請,您無需再通過電話確認。
但是,請您密切關注健康碼審核狀態,如發現健康碼變為紅色,說明填報信息有誤或檢測報告不符合要求未能通過審核,請立即查看未通過審核的原因(如圖),及時更正並重新提交申請。
特別提示:為避免影響您的行程,上傳檢測報告前請務必確認以下事項:
1、姓名、護照號、生日、直達中國航班出發地(應填寫最後一個中轉地,不能填寫始發地)、直達中國航班出發日期(應填寫最後一程航班登機日期)等信息是否填寫准確;
2、請務必填寫正確、有效的聯系方式,以便必要時使館工作人員能及時取得聯系,以免耽誤您的行程;
3、上傳的檢測報告截圖或照片是否清晰完整;
4、檢測報告上的姓名、性別、生日、證件號碼等信息是否准確(如檢測報告中的個人信息錯誤將不予通過審核,請盡快聯系檢測機構更正後重新上傳)。
九、我預定了周一出發的航班,但社區醫院周末不上班,拿不到檢測報告怎麼辦?
目前冰島社區醫院一般可在24小時內出具檢測報告,考慮到醫院周末不上班,建議謹慎選擇周一從冰島出發的航班。請您在預定機票前務必與擬前往的社區醫院聯系,了解情況,合理安排行程,避免受周末或當地假日影響而導致無法按時取得檢測報告或無法及時上傳,影響您的行程並造成經濟損失。
十、我的孩子是冰島國籍,外國公民須憑《健康狀況聲明書》入境,是否意味著我的孩子可以申請簽證,或持現有有效簽證入境中國了?
不可以。2020年3月26日發布的《中華人民共和國外交部、國家移民管理局關於暫時停止持有效中國簽證、居留許可的外國人入境的公告》仍有效。自2020年9月28日0時起,允許持有效中國工作類、私人事務類和團聚類居留許可的外國人入境,相關人員無需重新申辦簽證。入境後須嚴格遵守中國地方政府防疫管理規定。後續政策如有變動,我館將通過官網和微信公眾號及時公布最新消息,請及時關注。
十一、可從哪裡了解健康碼的申請步驟、注意事項和周邊主要中轉地中國使領館相關信息?
1、您可以登錄使館官網(http://is.china-embassy.org/chn)了解最新公告;
2、您可以撥打駐冰島使館咨詢電話進行咨詢:+354-5276688(咨詢時間:工作日9:00-12:00、14:00-17:00);或發送郵件至[email protected]進行咨詢;
3、健康碼申請步驟、注意事項及更多關於健康碼的問題可參考:https://hr.cs.mfa.gov.cn/help_two/help-two/hs.html
4、您可訪問冰島周邊主要中轉地使領館網站了解中轉地更多信息:
駐丹麥使館:https://www.fmprc.gov.cn/ce/cedk/chn/
駐法國使館:http://www.amb-chine.fr/chn/
駐瑞典使館:http://www.chinaembassy.se/chn/
駐法蘭克福總領館:http://frankfurt.china-consulate.org/chn/
⑦ 抗體檢測怎麼檢測(核酸、抗原、抗體檢測)
自 2020 年新冠疫情爆發以來,「核酸檢測」作為一項檢測是否感染的重要指標,開始反復出現在我們的生活中。2022 年 3 月 10 日,國務院應對新型冠狀病毒肺炎疫情聯防聯控機制綜合組發布通知,決定推進「抗原篩查、核酸診斷」的檢測模式,在核酸檢測基礎上增加抗原檢測作為補充。
抗原檢測是什麼?和其他的檢測手段有什麼不同?這篇文章,我們以新型冠狀病毒為例,講講常見的快速篩查手段,聊聊相關的原理以及適用范圍。
想要對一種疾病或是一種物質進行篩查,我們首先要弄清楚的就是「從何下手」的問題,其次是「如何檢測」,讓微觀世界的變化反映到我們眼前,幫助我們作出判斷。
我們面對的是病毒。根據大家耳熟能詳的中學生物課知識,病毒是一類由遺傳物質和蛋白質外殼組成的類生命體 。如果想對病毒的感染情況進行探測,就需要從它的組分下手。接下來的內容,希望大家帶著自己中學的生物知識閱讀。
以目前正在困擾我們的 SARS-CoV-2 為例。它屬於冠狀病毒科下,冠狀病毒亞科的乙型冠狀病毒屬,是已知的第七種能夠感染人類的冠狀病毒。所有的冠狀病毒都是具有 包膜 的 正義單鏈 RNA 病毒 ,也就是說,它們的遺傳物質是一條單獨的 RNA 鏈,並且這條 RNA 鏈可以直接作為 mRNA(信使 RNA)參與翻譯,指導蛋白質的合成。
編號為NPRC 2020.00002的毒種,圖片由國家病原微生物資源庫(中國疾病預防控制中心病毒病預防控制所)提供。
我們現在的目的是檢測標本中是否存在這種病毒,無論是檢測它本身,還是檢測病毒帶來的產物,能夠下手的方向也就是兩種:蛋白質外殼(包膜)、遺傳物質。
順著這個邏輯,那最顯而易見的方法就是檢查它「能不能看到」,但病毒本體小得很,SARS-CoV-2 的直徑在 80-120 nm,要想每個標本都拿電鏡過一遍是不現實的,人力物力和財力都撐不住。那麼更經濟實惠的方法,就是通過某些措施,讓 病毒的組分 ,或是因為病毒而出現的 某些特殊物質 積攢到一定數量級後發光、變色,出現 宏觀表現 。
那麼我們的問題就轉化成了,選擇一種可以觀察到宏觀尺度變化的方法,和病毒的組分、病毒引發的某種物質產生關聯。我們能選擇的物質也擺在檯面上:病毒的遺傳物質,在這里是它的 RNA;病毒的包膜,也就是蛋白質外殼;以及,如果你還記得一些基礎的生物知識,人體的免疫系統會在感染病毒之後產生抗體以抵抗入侵,它也是不錯的選材。
我們目前採用的幾種檢測方式,也就從這些物質(以及它們的相關物質)脫胎而來,分別為針對遺傳物質的核酸檢測,針對包膜的抗原檢測,以及針對抗體的血清抗體檢測。
作為病毒的遺傳物質,核酸序列載寫了能夠鑒定病毒為某一特定種的基因特徵,因此核酸陽性,也就意味著病毒在體內存在過。
我們目前進行的「核酸檢測」其實分為兩個部分。平常我們進行的「捅鼻子」「捅嗓子」取樣和後續的定性是第一部分。在取得標本之後,因為病毒量太少,樣本會在實驗室中進行一定次數的擴增,並根據熒光反應結果來判定陽性陰性。
第二部分,確定為陽性的樣本,還需要通過基因測序,確定樣本病毒的分型,以便溯源。這一步已經不屬於日常篩查的范疇,但在流行病學調查上具有重大意義,如果有興趣了解,可以參看 Wikipedia 簡要了解。
我們平常參與的作為 篩查 工具的核酸檢測,指的就是採集到定性的第一部分。
在感染了 SARS-CoV-2 之後,咽拭子、痰、下呼吸道分泌物、血液等標本中均可發現病毒核酸。不同部分標本核酸檢測的陽性率有一定差異,隨著病程進展,各個部位的檢出率也會發生變化。
我們習慣稱呼的「鼻拭子」與「咽拭子」,其實都是採集咽腔後壁的分泌物與組織,前者採集鼻咽,後者採集口咽。也有採用其他標準的,比如唾液等亦可作為檢測標本,本質上也是不同地區規定有差異
鼻(咽)拭子與(口)咽拭子已經是綜合了陽性率與便利程度的考量。糞便和尿液等其實也可以作為標本採集的對象。而且根據一項對 31 例患者的研究,肛拭子的准確率要高於鼻咽與口咽采樣,尤其病程後期,肛拭子確診病例的鼻拭子陽性率不到 30%。 4 但顯然,由於操作的限制,它無法作為早期篩查的首選手段。
接下來的工作,就是從獲取的那一點點標本中提取核酸。由於樣本中病毒的數量級很小,不足以拿來分析,還需要將其擴增並標記。需要用到的同樣是高中學過的知識:聚合酶鏈式反應(PCR)——這一步看起來麻煩,但由於它的原理和工序已經研究成熟,實際操作中只需要加好試劑送機器,整個核酸檢測的過程里最麻煩的還是讓待測者安安分分弄來標本(笑)。
各地疾控機構或檢測中心會采購合適的核酸 提取試劑盒 與核酸 檢測試劑盒 。提取試劑盒負責將 RNA 從混雜的樣本(細胞碎屑、分泌物、灰塵等雜質)中提取出來,常見的有磁珠法、離心柱法和釋放劑法,不同提取方法可能對後期檢測的准確度略有影響 。之後,提純出的 RNA 就會移交給檢測試劑盒(也有一些試劑盒將兩者合一),進行之後的工序。
檢測試劑盒帶著樣本在機器中進行的過程,就是這個檢測中最主要的反應:RT-qPCR(實時定量逆轉錄聚合酶鏈反應)。
接下來需要你撿起高中生物的知識。一般的 PCR 反應有以下幾步:
加熱:讓雙鏈 DNA 解旋變形,成為兩條單鏈; 退火:讓混合的單鏈 DNA 與根據需要復制的片段而設計好的引物結合; 延伸:調整溫度,讓 DNA 聚合酶順著引物開始工作,復制出新鏈,形成新的雙鏈。在對病毒的探測中,我們要做的工作也無非上面幾步,只是需要多出兩樣東西:
在第一次反應之前,使用 逆轉錄酶 (依賴 RNA 的 DNA 聚合酶),合成病毒單鏈 RNA 的互補鏈,組合成 cDNA ; 在退火與延伸的階段,除了引物和所需的酶外,還需要 TaqMan 探針 。你可以把 TaqMan 探針這樣理解:它的主體部分是一段寡核苷酸鏈,被設計成能和一小部分需要復制的基因片段配對成雙鏈的樣子;它一端接了一個熒光分子,另一端接了一個開關(淬滅基團),兩者和探針相連時,熒光就會被淬滅基團壓制,探測不到。退火時,這個探針會和引物一起結合在要復制的單鏈片段上。在延伸的過程中,DNA 聚合酶會把擋在面前的障礙物切碎,其中就包括這段探針,淬滅基團和熒光分子就這樣分離,熒光就表現出來。
隨著循環數的增多,擴增的 DNA 片段和熒光也越來越多。對比每個循環的熒光亮度和前若干次循環的基準亮度,我們就能得出目前的 DNA 片段量,也可以直接用循環數和熒光亮度做定性的判斷。
那麼具體復制哪一部分呢?既然要探測病毒,那我們就選取最有代表性的核酸片段。現行的標准中,ORF 基因與 N 基因是常用的檢測位點。
檢測試劑盒負責的就是將提取出的 RNA(樣本)投入後,根據試劑盒上的程序說明,設定對應的 PCR 溫度與時長,由機器控制完成擴增過程,在固定的環節收集熒光信號,記錄對應的循環數(Ct 值)。判斷陰性陽性 / 是否還具有傳染力的標准,就是看熒光信號達到閾值時,目前循環數是多少。根據目前現行的《新型冠狀病毒肺炎診療方案(試行第九版)》,解除隔離管理的標准為 Ct 值 ≥ 35 。和此前通行的 ≥40 標准相比,出院與解除隔離的時間會大大縮短 。
經 RT-PCR 的核酸檢測到現在都是確診的金標准,因為它在方法學的角度看來,(理論上)可以做到 100% 准確。但核酸檢測耗時長、對環境與操作人員要求高,在環境條件達不到標准、物資與儀器不齊全等情況下,大批量的核酸檢測會帶來巨大人力與財力消耗。
在本次疫情中,我們採用的免疫測定包括了快速抗原檢測與抗體檢測,它以 抗原-抗體反應 為基本原理,旨在通過抗原與抗體快速的中和效應,以較少的時間成本探測樣本中是否存在待測物。兩者都屬於免疫層析法的范疇。
以盒裝方式出現、可以自行操作的抗原檢測就很適合作為物資不足、自我測定等情況下的補充。
核酸檢測檢查的是病毒的(標志性)遺傳物質,是病毒的「內里」。那麼(快速)抗原檢測檢查的就是病毒的「外在」,直接檢查完整的病毒顆粒。目前通過審批的抗原檢測試劑盒包括三種類型:膠體金法、乳膠法、熒光免疫層析法。三者內在原理一致。但其中熒光免疫層析法試劑盒仍然需要專用的檢測儀或紫外線手電筒,不適合家庭自測;膠體金法和乳膠法則都是將檢查結果轉化成肉眼可見的條帶,差別在於用於標記上色的物質不同。
當然,抗原檢測自然有它的劣勢在,它的 假陰性率 (是陽性但顯示陰性)要更高,可能導致漏檢錯檢。但放在一杯茶就能出結果的時間優勢面前,准確性上的差距在某些特定情況下可以暫時讓步。
圖源:How the SARS-CoV-2 EUA Antigen Tests Work | ASM.org
和核酸檢測相比,抗原檢測增加了「鼻拭子」這一采樣途徑,降低了個人自測的難度。拭子上的樣本在緩沖液中洗脫,取液體滴加在加樣孔後,液體會因為毛細作用,帶著潛在的抗原,經過一片預載了抗體的區域(結合墊,conjugate pad)。
這片區域上的抗體,是抗目標抗原(SARS-CoV-2)的單克隆抗體,每一個抗體分子都和特別的標記結合,它們與樣本中的抗原發生反應,形成抗原-抗體復合物,並隨著毛細作用向下一條帶流去。
緊接著經過的是檢測線(T 線,test line),在檢測線上附著的同樣是抗目標抗原的單克隆抗體,你可以理解成這里的東西和結合墊上的一樣,只是沒帶標記。此時,如果受測者已經感染了 SARS-CoV-2,他留在樣本中的抗原形成的抗原-抗體復合物,會在此處與固定在線上的抗體再次結合。在這里,這些帶著標記的復合物不斷沉積,最終會顯示出一條或深或淺的條帶。條帶的顏色來源,就是之前結合墊上的抗體分子附著的標記,在膠體金法中是膠體狀態的金顆粒,在乳膠法中是上色的乳膠滴,在熒光法中是熒光分子。所以你在使用這類試紙時,會發現剛剛加樣結束,液體剛開始擴散的時候,擴散的最前端會有一點點很淡的顏色不斷推移,這就是還沒有固定沉積的標記的顏色。
接下來,液體繼續擴散,經過質控線(C 線,control line),在質控線上附著的是另一種抗體——『抗「抗目標抗原的單克隆 抗體 」 的 單克隆 抗體 』,簡稱「 二抗 」。這種新的抗體是讓上一種抗體在另一種動物的免疫系統中反應得來的,比如結合墊的抗體來自兔,那這里的抗體就來自羊,是羊抗兔的單克隆抗體。也就是說, 二抗的抗原是 之前在 結合墊上的抗體 。這條線就是為了檢測液體有沒有正常擴散、結合墊上的抗體有沒有失效等等而存在的。此時,液體中剩餘的大量來自結合墊的抗體就會作為抗原,與質控線上的二抗發生抗原抗體反應,形成復合物,顯出一條明顯的條帶。
由於結合墊上的抗體非常充裕,這條質控線條帶會出現得非常快、非常顯色,而檢測線由於抗原(病毒)數量不一定,顯色速度會有差別,但一般在 15 分鍾內就足夠判斷結果。所以不要看 C 線很明顯,T 線隱隱約約就覺得「沒事了」, T 線不管深淺,只要有,就是陽性 。
具體操作方面,可以參考醫政醫管局發布的 教學視頻。目前國家也在逐步推廣抗原自測試劑盒,在一定程度上可以減輕未來醫療與街道的壓力。
除了前兩種檢測手段外,還有一種使用不太多,但同樣重要的檢測方法,就是同屬免疫測定方法的「血清抗體檢測」。
抗體檢測採用的試劑盒與抗原檢測非常接近,但標本的限制更大——由於檢測的對象變成了抗體,標本就必須是明確有抗體存在的血液(或血漿、血清)。而且人體在初次感染病毒後,並不會第一時間內產生抗體。抗體能夠明確達到被檢測的數量級,一般是在初次感染(或接種疫苗)的一到兩周之後。這些條件限制了抗體檢測不能作為確診性質的檢查。目前,血清抗體檢測僅作為一定情況下檢查疫苗是否生效,或查驗受測者近期是否感染過新冠病毒的方法。
在人體中有五種抗體,分別是 IgA、IgD、IgE、IgG 和 IgM。IgA 主要負責黏膜免疫。IgD 與免疫反應激活有關。IgE 抵禦寄生蟲,同時也參與過敏反應。剩下的 IgG 與 IgM 就是對抗病原體的過程中,免疫系統派出的主力軍。
SARS-CoV-2 作為病原體,人體經刺激主要分泌的就是 IgG 與 IgM 兩種。現有的抗體檢測試劑盒,主要也是針對人體對 SARS-CoV-2 的 N 蛋白(核衣殼蛋白)或 S 蛋白(刺突蛋白)產生的 IgG 與 IgM。
抗體試劑盒的檢測裝置外觀和抗原檢測別無二致。二者的差別就是上文中提到的結合墊、檢測線、質控線上附著的物質。
這次,加樣孔中滴入的樣本可能有對 SARS-CoV-2 的抗體。因此,結合墊上就應當是帶了標記物的抗原——當然不可能放活病毒上來。一般這里使用的都是設計檢測的抗原蛋白,比如前文提到的 N 蛋白或 S 蛋白,或是重組病毒,無論是哪種,它都必須包含受體結合域(RBD)作為抗體結合的靶點。在檢測線上,附著的就是抗 IgM 或抗 IgG 抗體,以捕獲結合了抗原的抗體蛋白。最後,質控線上附著抗原的特異性抗體,捕獲剩餘的游離抗原。
總的說來,三種檢測方式針對的是不同的需求,互有優勢,互相補充。核酸檢測作為金標准,直接查驗病毒的 RNA,負責看被檢者帶不帶病毒;抗原檢測作為快速檢測方法,查的是病毒的蛋白質,但准確度不如核酸檢測,對傳染力強的感染者更有效;抗體檢測查的是疫苗有沒有生效、人近期有沒有感染過病毒。
近期,新冠疫情在各地卷土重來。Omicron 變種與此前流行的 Delta 變種相比,雖然病死率與重症率明顯下降,但潛伏期更短,病毒復制速度更快,傳染力明顯增強。希望大家在這樣的環境中保持健康。
⑧ 什麼是抗血清檢測法
植物病毒是一種由核酸和蛋白質組成的抗原,當把經過純化的某種已知病毒注射到脊椎動物體內後,就會產生一種相應的抗體。
抗體主要存在於血清中,含有抗體的血清稱為抗血清。注射到動物體內的病毒不同,所產生的抗血清也不同。
抗原和抗體之間能發生高度專一性的免疫反應,藉助這種反應,就可用已知病毒的抗血清鑒定未知病毒的種類。其方法之一是將待測植株的一滴汁液加到幾種不同的抗血清中,在哪一種抗血清中出現沉澱,就證明該植株帶有哪一種病毒。
這個過程在很短時間內即可完成。因此,病毒的抗血清鑒定法既靈敏又快捷,是目前常用的一種病毒檢測方法。